Le rôle du Toll-Like Récepteur 6 dans la réponse à l'infection par la listeria

Max F.

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Le rôle du Toll-Like Récepteur 6 dans la réponse à l'infection par la listeria

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Rôle du Toll-Like Récepteur 6 dans la réponse à l'infection par la listeria, expérience biologique, micro-organismes, système immunitaire, agents infectieux, mécanismes cellulaires, immunité innée, récepteurs transmembranaires, culture de macrophages, cellules dendritiques

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Résumé du document

Tous les organismes du monde vivant prolifèrent dans un environnement infesté de micro-organismes, dont certains sont potentiellement pathogènes. Leur survie dépend de leur capacité à se défendre contre ces agresseurs, c'est la fonction du système immunitaire. Lorsqu'un agent infectieux pénètre dans un organisme, des mécanismes cellulaires et moléculaires entrent en jeu. Les cellules phagocytaires internalisent le pathogène, les réactions inflammatoires sont déclenchées et la cascade du complément activée.
Ces réponses rapides correspondent à l'immunité innée, dont l'initiation repose notamment sur les récepteurs Toll-like. Ces récepteurs sont des PRR (Pattern Recognition Receptors), présents à la surface des cellules présentatrices d'antigènes (CPA) essentiellement, ils participent à la reconnaissance de différentes structures présentes au sein des pathogènes, les PAMPs (Pathogen Associated Molecular Pattern).

Sommaire

I - Introduction
II - Matériel et méthodes
1) Les lignées de souris
2) Méthodes in vitro
2.1) Culture des macrophages
2.2) Culture des cellules dendritiques
2.3) Expérience de stimulation
2.4) Tests ELISA (Enzym Linked ImmunoSorbent Assay)
2.5) Analyse au cytomètre de flux des macrophages stimulés
2.6) Dosage du NO
III - Résultats
1) Résultats des tests ELISA et du dosage du NO in vitro
1.1) ELISA des macrophages après stimulation
1.2) ELISA des cellules dendritiques après stimulation
1.3) Résultats des tests de dosage du NO
2) Analyse par Cytométrie en flux des Macrophages stimulés pour le
marqueur d'activation CD40.
IV - Discussion

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Extraits

[...] - 10 - V - Bibliographie Ferrandon D ; Royet J : La drosophile, un modèle pour l'étude de la réponse immunitaire des invertébrés Regard sur la Biochimie ; n°1 ; 2002 ; 17-23 Cousens Wing Innate defenses in the liver during Listeria infection Immunological Reviews ; n°174 ; 2000 ; 150-159 Edelson B ; Unanue E : MyD88-Dependent but Toll-like Receptor 2-independent Innate Immunity to Listeria : No Role for Either in Macrophage Listericidal Activity The Journal of Immunology ; 169 ; 2001 ; 3869-3875 Takeuchi Kawai Sanjo Copeland N.G; Gilbert D.J; Jenkins N.A; Takeda Akira S : TLR6 : Anovel member of an expanding Toll-like receptor family Gene ; n°231 ; 1999 ; 59-65 Ozinski Underhill Fontenot Hajjar Smith Wilson C ; Schroeder L ; Aderem A : The repertoire for pattern recognition of pathogens by the innate immune system is defined by cooperation between Toll-like receptors PNAS ; n°25 ; vol 97 ; 2000 ; 13766-13771 Seki E ; Tsutsui H ; Tsuji N ; Hayashi N ; Adachi K ; Nakano H ; Futatsugi-Yumikura S ; Takeuchi O ; Hoshino K ; Akira S ; Fujimoto J ; Nakanishi K : Critical Roles of Myeloid Differenciation Factor 88-Dependent Proinflammatory Cytokine Release in Early Phase Clearance of Listeria monocytogenes in Mice The Journal of Immunology ; n°169 ; 2002 ; 3863-3868 Bulut Y ; Faure E ; Thomas L ; Equils O ; Arditi M : Cooperation of Toll-like Receptor 2 et 6 for Cellular Activation by Soluble Tuberculosis Factor and Borrelia burgdorferi Outer Surface protein A Lipoprotein : Role of Tollinteracting Protein and IL-1 Receptor Signaling Molecules in Toll-like Rceptor 2 signaling The Journal of Immunology ; 167; 2001 ; 987-994 Takeuchi Kawai Muhlradt PF, Morr Radolf JD, Zychlinsky Takeda Akira S. – Discrimination of bacterial lipoproteins by Toll-like receptor 6 [en ligne sur PubMed – indexed for MEDLINE]. – Mis sur site en juillet 2001. [Réf. du 26 mai 2003]. – Disponible sur Internet : Wetzler LM. The role of Toll-like receptor 2 in microbial disease and immunity Vaccine Jun 1;21 Suppl 2:S55-60. [...]

[...] La plaque est tapissée par des anticorps primaires (anticorps monoclonal de rat pour le test IL12, serum immun de chèvre pour le testTNF) spécifique de l'antigène désiré, et laissée une nuit à température ambiante. Après 3 lavages au PBS 1X tween et 1 au PBS la plaque est saturée pendant un minimum de trois heures au PBS/BSA (Bovin Serum Albumin) à température ambiante pour empêcher les fixations non-spécifiques, puis elle est relavée comme précédemment. Ensuite, les échantillons dilués au PBS/BSA sont déposés et laissés incubés toute la nuit à 4°C. L'antigène, contenu dans l'échantillon, va alors se fixer spécifiquement au niveau des anticorps primaire fixés. Une gamme étalon de l'échantillon est également réalisée. [...]

[...] Connaissant la possibilité d'hétérodimérisation du TLR 2 avec le TLR on peut se poser la question de l'existence d'une telle association fonctionnelle lors de la réponse à l'infection par la Listéria. Donc, après avoir démontré au sein du laboratoire le rôle de TLR2, le but de notre étude était de mettre en évidence un éventuel rôle du TLR6 lors de cette infection. II - Matériel et Méthodes Les lignées de souris Les souris utilisées sont des souris TLR6 sur fond C57BL/6 BC5, qui sont élevées au statut sanitaire Exempt de tout Organisme Pathogène Spécifique (EOPS) au sein du Centre de Distribution Typage et Archivage (CDTA) à l'institut de Transgénose d'Orléans. [...]

[...] Nous avons voulu nous pencher sur un rôle éventuel de TLR 6 qui est capable d'hétérodimérisation avec TLR 2. Nous avons comparé des CPA de souris TLR 6 et TLR 6 pour leur capacité à synthétiser des cytokines et du NO, et à induire l'expression de récepteurs d'activation des cellules T en réponse à la Listeria. [...]

[...] Chaque TLR reconnaît un ligand qui lui est spécifique. Le TLR 4 joue un rôle direct dans la reconnaissance du lipopolysaccharide présent à la surface des bactéries Gram négatives. Depuis cette découverte, dix autres TLRs ont été mis en évidence. Le TLR 5 reconnaît la flagelline, constituant des bactéries flagellées, le TLR 9 est spécifique de l'ADN CpG bactérien, le TLR 2 interagit avec les peptidoglycanes, le LTA constituant des bactéries Gram positives, et le zymosan, constituant de la paroi des levures. [...]

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