Étude de la corrélation structure-activité des neurones sensoriels en réponse au produit de dégranulation des mastocytes

David M.

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Étude de la corrélation structure-activité des neurones sensoriels en réponse au produit de dégranulation des mastocytes

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Thèmes abordés

Biologie, santé, technologie, réseau des neurones, mastocyte, épiderme, endocrine, paracrine, communication sensorielle, microscopie, nerf, anticorps, kératine, derme, hypoderme, synapse, neurone sensoriel, cytokinèse, neurotransmetteur, puits de culture, fluorochrome, fluorescence

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Résumé du document

La peau est le plus grand organe chez les mammifères. Elle représente 15% du poids de l'Homme adulte. Elle est composée de différentes couches cutanées et non-cutanées qui diffèrent selon leur épaisseur et leur diversité cellulaire. Ces couches sont l'épiderme, le derme voire l'hypoderme selon les auteurs.
(...)
La diversité des types cellulaires ainsi que leurs interactions confèrent différents angles pour aborder la peau. Effectivement, la peau peut être vue comme un organe immunitaire, endocrinien si l'on s'intéresse aux actions des hormones et aux voies de communication endocrine, paracrine si l'on s'intéresse aux communications croisées rapprochées entre différentes cellules et n'impliquant pas de synapses, ou bien sensoriel si l'on s'intéresse aux communications croisées rapprochées impliquant des synapses.
(...)
Ce stage est dans la continuité d'un ancien projet du Laboratoire Interactions Épithéliums Neurones (LIEN) avec un objectif technique identique, dans un contexte scientifique différent. Ce précédent projet a fixé le choix des procédures (ensemencement de 1 raton/5 puits, quadrillage et autres), du matériel (flexiperms, lame en verre, feutre permanent noir), ainsi que la première méthode corrélative (captures de photos au smartphone et sous caméra, contour de structures similaires sans superposition et prise des photographies de la zone d'illumination des puits). Ces choix ont été utilisés ou réadaptés pour ce présent stage.

Sommaire

Introduction
1. L'organisation de la peau
2. La peau, un organe sensoriel
3. Communication croisée entre les nerfs sensoriels avec d'autres populations cellulaires
Matériel et Méthodes
1. Préparation des puits de culture
2. Extraction de cellules du ganglion dorsal rachidien
3. Ensemencement des GRD
4. Imagerie calcique
5. Immunocytochimie
6. Analyse en microscopie corrélative
Résultats
1. Préparation des puits de culture : choix de la couleur du marqueur permanent
2. Extraction et culture primaire de GRD : nombre de puits à ensemencer
3. Tests de corrélation des résultats issus des microscopies droites et inversées
Discussions techniques
1. Ensemencement
2. Quadrillages géométriques blancs comme repères spatiaux
3. Fluorescence
4. Prise en main du smartphone et analyses en microscopie corrélative
5. Déplacement cellulaire

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Extraits

[...] Tout le détail des réactifs, consommables, appareils et logiciels sont répertoriés en annexes 1 à 3. Préparation des puits de culture Les lames en verre et les flexiperms (coniques) qui sont des supports en silicone permettant de délimiter la zone de culture, sont stérilisés et déposés dans des boîtes de Pétri stériles. Une fois secs, les flexiperms sont montés sur ces lames flexiperm/lame) formant un puits. Des motifs sont ensuite tracés au dos du montage, à l'aide d'un normographe et d'un feutre permanent. [...]

[...] https://doi.org/10.1016/j.alit.2022.04.002. [HYPERLINK: https://doi.org/10.1016/j.alit.2022.04.002] Wang, Fang, Donald P. Julien, et al.varo Sagasti « Journey to the Skin: Somatosensory Peripheral Axon Guidance and Morphogenesis ». Cell Adhesion & Migration 7 388-94. https://doi.org/10.4161/cam.25000. [HYPERLINK: https://doi.org/10.4161/cam.25000] Xu, Xiaohua, Nathan J. Wittenberg, Luke R. Jordan, Shailabh Kumar, Jens O. Watzlawik, Arthur E. Warrington, Sang-Hyun Oh, et Moses Rodriguez « A Patterned Recombinant Human IgM Guides Neurite Outgrowth of CNS Neurons ». [...]

[...] Ensemencement Dans un premier temps, il s'est avéré que le nombre de puits à ensemencer préconisé par le précédent projet (cinq puits) n'était pas adapté pour ce stage, car il générait de la pollution cellulaire (probablement des cellules gliales) masquant de possibles GRD. De ce fait, augmenter le nombre de puits (cinq à huit puits) a permis d'améliorer la visibilité de possibles GRD et ainsi de passer aux autres objectifs de ce stage (ICC, imagerie calcique et test de corrélation). Le nombre de puits à ensemencer pourrait donc être imputé à une variabilité interpersonnelle. [...]

[...] Scientific Reports 3 2267. https://doi.org/10.1038/srep02267. [HYPERLINK: https://doi.org/10.1038/srep02267] Yousef, Hani, et Sandeep Sharma Anatomy, Skin (Integument), Epidermis. StatPearls Publishing LLC. ReasearchGate. https://www.researchgate.net/publication/322063118. [HYPERLINK: https://www.researchgate.net/publication/322063118] Yuan, A., T. Sasaki, A. Kumar, C. M. [...]

[...] Peterhoff, M. V. Rao, R. K. Liem, J.-P. Julien, et R. A. Nixon « Peripherin Is a Subunit of Peripheral Nerve Neurofilaments: Implications for Differential Vulnerability of CNS and Peripheral Nervous System Axons ». Journal of Neuroscience 32 8501-8. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.1081-12.2012. [...]

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